东京热官网 LabEx 流式服求实例共享——小鼠脾脏的9色分析

本周共享的是LabEx摄取BD Celesta（3激光12色）对小鼠脾脏进行启动和效应T细胞以及Th17细胞和救援性T细胞（Tregs）9色分析实例东京热官网。

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扫数这个词panel一说念为包括名义marker和核内转录因子，抗体使用量按照厂商推选。

    

样本类型：小鼠（脾脏）

绝色诱惑

仪器：BD Celesta

  

本质Panel：

     

本质建筑：

   

类型

管数

作用

Blank

1

救援电压，证明阴性细胞群位置

单阳管东京热官网

9

救援赔偿

样本管

1

负责样本管

   

本质圭表：

1、小鼠脾脏研磨成单细胞悬液，过70um滤网，预冷1*PBS清洗

2、Ficol索求PBMC（若有红细胞，可再进行裂红不休），细胞计数（1.0x106个/ml）

3、24孔板种板，每孔1ml

4、细胞刺激：

4.1、每孔加入2ul刺激阻断剂；

4.2、37℃、5％CO2下孵育4-6小时；

4.3、孵育为止后吸取培养液至新的EP管中，300g离心5min；

4.4、弃上清，用1ml PBS重悬细胞千里淀，300g离心5min；

4.5、弃上清，用剩余液体重悬，用于后续本质操作；

5、细胞染色：

按照Live/Dead、FcR阻断剂、名义、破膜、胞内核内的礼貌进行染色

   

本质效果

   

本质试剂

   

货号 称呼 品牌 560401 Alexa Fluor® 647 Rat anti-Mouse Foxp3 BD Pharmingen 563061 BD Horizon™ BV605 Rat Anti-Mouse CD25 BD Pharmingen 553134 PE Rat Anti-Mouse CD44 BD Pharmingen 557659 APC-Cy™7 Rat Anti-Mouse CD45 BD Pharmingen 553061 FITC Hamster Anti-Mouse CD3e BD Pharmingen 564171 BV786 Rat Anti-Mouse IL-17A BD Pharmingen 550954 PerCP-Cy™5.5 Rat Anti-Mouse CD4 BD Pharmingen 564406 Fixable Viability Stain 510 BD Pharmingen 562574 Transcription Factor Buffer Set BD Pharmingen 554714 Fixation/Permeablization Kit BD Pharmingen abs9101 1*红细胞裂解液 Absin abs7008 70um细胞过滤器 Absin abs9484 RPMI-1640培养基 Absin abs972 胎牛血清（优级） Absin abs962 1*PBS Absin

   

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